Què és l'intercanvi ió cromatogràfic? + Exemple

Què és l'intercanvi ió cromatogràfic? + Exemple
Anonim

Resposta:

És un procés per separar diferents proteïnes basant-se en les seves propietats de càrrega i unió a un material.

Explicació:

A diferents pH, diferents proteïnes tenen diferents càrregues. Col·locant una barreja de proteïnes a un pH fixat, podeu tenir una barreja que conté proteïnes amb diferents propietats de càrrega.

Si aquesta barreja de proteïnes s’aboca en una columna que conté un material amb una càrrega sobre ella, la columna s’uneix a les proteïnes amb càrrega oposada.

A continuació, podeu utilitzar diferents solucions que continguin diferents quantitats d’ions per tal d’eluir (deslligar) les proteïnes de la columna.

Per exemple, diuen que teníeu una barreja de proteïnes de les quals voleu purificar una proteïna en particular. Si sabíeu que a un pH determinat es va carregar positivament la vostra proteïna d’interès, podíeu abocar la barreja en una columna que contenia un material carregat negativament.

Totes les proteïnes que no portaven càrrega, o quan es carregaven negativament, passaven directament per la columna. Aleshores es podria alliberar la proteïna carregada positivament inundant la columna amb ions positius que completessin la càrrega negativa de la columna. Aquesta competició provocaria que eluís la vostra proteïna d’interès.

Aquí teniu un exemple d’aquest fet.

Cada safata conté un tampó a una concentració diferent i, com es pot veure a la mostra de 175 mM (cantonada superior esquerra), molt poc proteïna vermella / marró s'ha unit a la membrana carregada, ja que hi ha hagut competència entre els ions del tampó i la proteïna per als llocs d’acoblament carregats de la membrana (els ions del tampó han "guanyat" perquè hi ha més d’ells i per tant han impedit que la proteïna siga unida). A la mostra situada a la part inferior dreta, moltes proteïnes s’han unit a la membrana perquè hi ha menys ions presents per competir per llocs d’enllaç.

En aquest vídeo podeu veure la cromatografia d’intercanvi d’anions en funcionament: