Per què s'utilitza GAPDH en Western Blot? + Exemple

Per què s'utilitza GAPDH en Western Blot? + Exemple
Anonim

Resposta:

GAPDH s'utilitza sovint com a control de càrrega.

Explicació:

En Western blotting solem utilitzar GAPDH com a control de càrrega. Això significa que si sondegem per GAPDH podem comprovar que tenim quantitats equivalents carregades de proteïnes en diferents carrils de la taca.

Un exemple d’ús - diuen que tenim una malaltia que pensem provoca l’elevació d’una determinada proteïna a la cèl·lula. Formaríem una mostra de cèl·lules "sanes" i una altra mostra de cèl·lules "malaltes". A continuació, carregarem quantitats de proteïna equivalents de les dues mostres en un gel per al Western blot.

Després d’explorar la taca de la nostra proteïna d’interès, trobem que a les cèl·lules malaltes el nivell de proteïna és realment elevat (és a dir, es produeix una banda més fosca a la taca). Per demostrar que aquest augment de proteïnes és degut a un canvi d’expressió a la cèl·lula, en lloc d’un artefacte de càrrega (és a dir, la banda de més instància és causada per un canvi en l’expressió de les proteïnes a les cèl·lules i no per la càrrega accidental de més de la mostra de la "malaltia" que la "sana" també sondem la taca de GAPDH per demostrar que els nivells totals de proteïna són els mateixos en els dos carrils.

Per tant, fent això, estem demostrant que s'ha carregat una proteïna equivalent en els dos carrils i que el canvi en la intensitat de la banda que estem observant es deu a canvis en l'expressió de proteïnes de la proteïna d'interès.