En la prova ELISA, què fan els anticossos primaris i els anticossos secundaris?

En la prova ELISA, què fan els anticossos primaris i els anticossos secundaris?
Anonim

Resposta:

Això depèn del tipus d'assaig ELISA.

Explicació:

ELISA = Assaig immunològic vinculat a enzims.

Hi ha diferents tipus d’assaigs ELISA. El que necessiteu és:

  • anticòs amb un enzim associat
  • antigen al qual es vincula l’anticòs
  • substrat de l’enzim que causa una reacció mesurable

El enzim adjunt a l’anticòs és sovint HRP (peroxidasa de rave picant). El HRP pot reaccionar amb diferents substrats que canvien de color o emeten llum, tots dos mesurables.

La imatge mostra una visió general del document diferents tipus dels assajos ELISA. Us explicaré com funcionen a continuació.

ELISA directa

Es recobreix una placa amb l’antigen (Ag) i un anticòs primari amb enzim s'afegeix. Quan s’afegeix el substrat, la reacció es produirà i és proporcional a la quantitat d’interaccions entre l’anticòs i l’anticòs.

ELISA indirecta

Una vegada més, es recobreix una placa amb l’antigen i una anticòs primari s'uneix a l’antigen. A anticòs secundari s’afegeix que s’uneix al primer anticòs. El segon anticòs conté l'enzim que reacciona amb el substrat.

Sandvitx ELISA

Aquí participen dos o tres anticossos. Un anticòs de captura s'uneix a les plaques i s'uneix a l’antigen. A continuació, se segueixen els mateixos passos que el mètode directe (només un anticòs) o indirecte (dos anticossos).

ELISA competitiu

De vegades anomenat inhibició ELISA, és una mica més complicat. Es recobreix una placa amb l’antigen que cal investigar. A anticòs primari amb l’enzim s’incuben primer amb una mostra amb una concentració desconeguda del mateix antigen. Això s’afegeix a la placa i permet que els anticossos que encara siguin lliures reaccionin amb l’antigen de la placa. Després que els complexos d'anticossos-antígens de la mostra siguin rentats, s'afegeix el substrat.

Quan la mostra desconeguda té molta antigen, hi haurà menys anticorps lliures per unir-se a la placa = senyal inferior.